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科学检测猪病毒性腹泻,就用明日达方案!

2021-11-15 1611人阅读 来源:

随着秋冬季的来临,猪场腹泻问题也变得逐渐严重。引起猪群腹泻的原因有很多种,除了饲养管理(栏舍潮湿、温度变化和断奶转群等)和饲料原因导致的非传染病因素外。还有寄生虫、细菌性和病毒性传染病因素导致的猪群腹泻。其中,绝大部分腹泻问题主要是由猪性腹泻相关病毒感染引起,这个结论也可从各实验室的腹泻样本检测数据得到佐证。特别是2010 年以来由 PEDV变异株所致的仔猪腹泻及2014年发现的致病性PDCoV,使我国养猪业面临新的威胁和挑战,如何利用实验室检测辅助手段防控秋冬季病毒性腹泻是当前关注的热点。


一、什么是猪病毒性腹泻?

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二、国内猪病毒性腹泻流行情况


由于非瘟疫情压力,养殖企业对于生物安全非常重视,认为各种洗消措施执行的非常到位,但是有些举措可以很好的防控非瘟,不一定能防控得住病毒性腹泻,与ASFV主要以接触传播不同,PEDV传播速度更快,腹泻猪只排毒量大,且PEDV可以通过气溶胶的方式远距离传播,这也提示我们要关注不同病原的生物学特性。通过对国内不同省市公布的流行病学调查数据来看,猪病毒性腹泻有一定的季节性,多以冬春季节多发,夏季也时有出现。以PEDV感染为主,呈普遍流行,2010年10月以后,国内发生了一系列大规模的PEDV疫情,造成了巨大的经济损失。这些暴发是由新出现的传播力极强的非SINDEL毒株引起的,新生仔猪的死亡率达到50-100%。随后也发现了新的SINDEL毒株,证明经典毒株和原来疫苗保护不了的变异株在国内共同流行。


很多猪企对猪病毒性腹泻的认知依然停留在PEDV上,对于其他腹泻病毒缺少关注,但是近几年的监测数据表明,其他病毒单独或者混合感染引起性腹泻病例也逐渐增加。PDCoV虽然出现时间较晚,但研究表明该病毒具有比PEDV更广泛的组织嗜性,以及细胞的感染谱,有更大的人畜共患的潜在风险,危害不容小觑,且该病还能和PEDV共同出现加重临床症状,也应作为重点监测防控疫病;PoRV在部分地区流行,近年来感染率也在逐渐增加;TGEV致病性低于PEDV主要呈现散发流行态势,但因临床症状与PEDV有相似,易造成诊断的混淆,影响猪场防控策略的制定和执行。


目前猪群感染状况不仅仅是单一病毒感染,很多猪群出现了二重甚至三重感染的情况,主要以与PEDV混合感染的方式出现,以PEDV/PoRV、PEDV/PDCoV、PEDV/TGEV和PEDV/PoRV/TGEV这几种混感组合较多,当出现混合感染时,对猪群的致死性更强,也更难处理。由于RNA冠状病毒的变异能力较强,病毒的基因组也在不断发生着变异,如TGEV发生突变,形成一种能够感染呼吸道的新毒株PRCV。在欧洲出现了PEDV/TGEV致病性重组的变种毒株(猪肠道冠状病毒,SeCoV),目前仅在德国意大利和斯洛文尼亚有报道,但其致病性、临床危害以及交叉保护等更多细节信息尚不清楚。以上出现的种种变化,对病原的诊断和防治要求也越来越高,也给猪场生产带来了巨大的压力。


三、明日达科技猪病毒性腹泻检测方案及产品优势


对于腹泻的防控,有很多解决方案,除做好饲养管理、疫苗免疫等常规的措施之外,科学的监控与正确的诊断,是综合防控的前提,利于尽早发现风险,提前做好防控布局,减少仔猪伤亡和损失。检测过程中有几个时间节点需要我们多加关注。



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检测时间节点:


1.日龄越小的仔猪抵抗力越弱,如出现腹泻症状,应立即做出精确诊断,确定或排除病因。


2.母猪、公猪对腹泻病毒具有较强的免疫力,一般不表现临床症状,但可以向外界环境排毒,故应在母猪产前,公猪取精前做肛拭子监测,以便尽早发现风险,并及时采取措施。

3.除了对环境中非瘟病毒监测外,还应对猪腹泻病原进行检测,特别是拉猪车、产房环境等重点区域;如发现猪群出现病毒性腹泻,应采取检测方式确认感染范围,做好溯源、诊治和减毒措施。

4.当猪场发生腹泻,对采取返饲方式的猪场,应对返饲物做病原(伪狂、蓝耳、猪瘟、细小等)筛查,并将筛查后混合的返饲物做腹泻病毒RNA RT-PCR定量,确保个体有足够的感染剂量,返饲几天后,对母猪群腹泻粪便再次抗原检测,确保返饲成功,猪群达到良好的免疫一致性。



明日达病毒性腹泻防控方案

相对于病毒分离法、荧光抗体检测、免疫组织化学法、常规RT-PCR检测和胶体金检测,多重RT-PCR方法有着显著优势:① 敏感性非常高,可以做到半定量;② 能确诊单一感染或混合感染, 达到诊断和鉴别的双重目的;③ 比传统检测方法更快速、方便,更能贴近一线生产。


根据不同地区猪病毒性腹泻流行状况及客户自身设备限制因素,我们为不同需求客户提供不同的科学精准的检测服务方案:




  • 方案一、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR检测试剂盒+ PDCoV单重RT-PCR试剂盒

  • 方案二、PEDV/TGEV/PDCoV三重RT-PCR检测试剂盒+PoRV单重RT-PCR试剂盒

  • 方案三、PEDV+TGEV+PDCoV+PoRV单重RT-PCR试剂盒

  • 方案四、可为大型客户提供定制猪病毒性腹泻RT-PCR试剂盒产品


产品优势

  操作简单、多项目同步进行

提供2种方案:

如果实验室拥有4通道及以上PCR仪器,可以直接选择腹泻类多重PCR产品进行检测

 多重PCR产品:单孔可做多个病毒性腹泻病原检测项目

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR检测试剂盒为例,扩增曲线如下图(2)所示:

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图2、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR扩增曲线


如果实验室拥有4通道以下PCR仪器,可以选择空间单重产品

 多重PCR产品(空间单重):由空间单重PCR产品形成多重优势。明日达产品多个检测项目,运行程序全部一致。一台仪器一个程序一次运行即可检测多个疾病!


酶与PCR反应液为两管设计(当前产品),减少因操作导致的误差

即将推出一管式高度预混液,只需分装加样即可上机检测,让操作更简便,敬请期待!


拥有高活性反转录体系,10min即可完成反转录步骤,搭配明日达自主研发15min磁珠自动化提取,从提取到检测全流程仅需90min。



  特异性强

明日达腹泻类试剂盒能够特异性扩增PEDV、TGEV、PoRV以及PDCoV靶标,相互之间无交叉反应;同时对CSFV、PPRSV、PCV2等十几种其他猪病无交叉反应。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR检测试剂盒为例:

 用设定的多重RT-PCR反应条件对PEDV、TGEV和PoRV标准品进行单独或者两两混合检测:

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 用设定的多重RT-PCR反应条件对PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV标准品进行检测,结果如下图(9)所示:

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图9、加入PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV

③  敏感性和重复性好

将内部核酸质控品稀释到 100copies/μL, 10copies/μL, 1copies/μL,0.1copies/μL,共计 4 个梯度, 每个梯度做 24 个平行检测, 计算每个梯度的检出率,平均 Ct 值和变异系数(CV%)。


以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR检测试剂盒为例(表1):


表1 敏感性和重复性实验


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从结果可知,PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR最低检测限为1copies/μL, 所有梯度的检测CV%均在2%以下,说明该产品具有良好的敏感性,特异性和稳定性。


结 语

随着腹泻病毒自身不断变异重组,致病因素也逐渐增多,猪场兽医工作者对猪只的混合感染的认识不够,没有很好的鉴别手段,就有可能给腹泻病的诊治带来误导,错过了诊治的黄金期,给猪场带来巨大经济损失。由于近几年全行业养殖水平的提高,中大型甚至是小型猪企都树立了疫病防控的先进理念,也有的建立了能为自己猪场服务的高水平实验室检测体系,从而针对复杂的问题,能够迅速剥茧抽丝,找出主要问题所在,从而将损失最小化。明日达科技提供的猪病毒性腹泻多种RT-PCR解决方案操作上更便捷、方法精准科学、产品敏感性特异性好,可为更多猪场解决诊断难题。

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