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会议分享 | 禽白血病的检测技术现状

2023-06-30 842人阅读 来源:

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2023年6月12-14日,第七届中国动物健康与食品安全大会在成都圆满举办。北京明日达科技发展有限责任公司作为联盟理事单位成员禽白血病精准净化方案参会,并在“肉鸡健康养殖与食品安全”平行论坛作《禽白血病的检测现状》报告。

报告笔记(主讲人:孟藏龙)


禽白血病是一类由禽白血病病毒引起的家禽多种肿瘤性疾病的总称。它除了会导致肿瘤致死外,还会引起很多亚临床症状,比如说产蛋性能、生产性能下降,在免疫禽病疫苗时出现免疫抑制的情况。

根据禽白血病经典亚群分型方法共可以分为11个亚群,在自然状态下可感染鸡主要是ALV-A、B、C、D、E、J、K七个亚群,其中ALV-E属于鸡内源性的禽白血病毒。禽白血病毒是非常重要的垂直传播性疾病,它的传播放大效应是非常惊人的,一只感染的祖代鸡在不检测淘汰的情况下,会生产24万只感染禽白血病的商品鸡。正是由于它会对养鸡业造成重大危害,所以禽白血病的净化已经达成行业共识。

禽白血病的净化难点

实现全国性的禽白血病净化是非常困难的。原因也很多,国内家禽养殖模式复杂,有散户,规模化养殖场,而且鸡的品种较多,共同进行监测净化,难度可想而知。并且国内白羽肉鸡种源并没有完全实现自给自足,依然有进口的需求,而进口的种源也未必是完全干净。从保护易感动物角度来看,药物治疗和疫苗免疫并不可行,我们只能通过以检测淘汰的方式来实现禽白区域或者场内净化。但是检测净化同样面临很多的问题。其中最为关注的有3点,一个是内源性禽白血病毒的干扰问题严重。第二个就是诊断试剂的质量参差不齐,主要体现在试剂的敏感度低和稳定性差这两个方面。第三个就是针对k亚群检出率不高的问题特别突出,K亚群的复制能力相较于其他亚群来说较慢,国内外很多文献对这一点也有大量的研究。据推测,极大可能是因为它的LTR区域源自ALV-E。这个LTR区域可能是某些商业ELISA试剂盒对ALV-K亚群检出率低的主要原因。还有就是这么多亚群的禽白病毒,变异重组的现象时有发生,这也会加大了禽白血病净化的难度。


当前禽白血病病原主要检测技术

禽白血病毒的检测净化过程中需要检测两个抗原。一个是群特异抗原,就是p27抗原,这个抗原非常保守,各亚型之间的p27同源性非常高。另外一个是亚群特异性抗原,也就是gp85,每种亚型的gp85同源性不高,所以可以做亚型的鉴定。

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▶在做群特异性鉴定中常用到的是病毒分离方法,这个也是国际公认的特异性最强的一种检测方法,但是它对人员操作要求非常高,不同的人在同一时间地点做,都会有很大的区别,而且检测时间长,成本高,所以我们只在ELISA抗原初筛为阳性之后再做分离培养。

▶ELISA方法是禽白净化常用的核心检测方法,优点比较多,如操作简单、可以大批量检测、敏感度高,特异性强,样本适应性较广,但缺点是不能区分内外源。

▶胶体金的方法虽然操作简单,但是它的敏感性不高,跟ELISA方法相差较大,容易出现漏检的情况。

▶PCR方法在其他动物疫病检测中已经大范围使用,具有显著的优点。但是在禽白检测过程中,并没有大面积推广使用。究其原因,主要是因为病毒变异,引物不能完全覆盖目标基因;还有就是宿主体内存在大量的内源ev位点,容易出现假阳性的情况。

▶还有一种亚群特异性检测方法是IFA技术,它是利用ALV的表面抗原和特异性的抗体结合的一种方法。

通过比较上述几种禽白血病的检测方法的优劣势我们就可以了解了为什么当前的检测技术依然是以p27抗原ELISA技术和病毒分离培养为主要的检测手段了。


试剂盒性能现状

当前p27抗原ELISA试剂盒的产品质量参差不齐,对于试剂盒的敏感性和稳定性我们尤其关注。我们对这两个方面也做了一些研究比对工作,并得出了一系列结论。

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实验1结论:明日达两款试剂盒对p27蛋白的最低检测限可以达到0.61ng/ml,一家进口、两家国产的试剂盒可以达到1.22ng/ml,还有一款国产产品为4.88ng/ml。整体来看,大部分国产的试剂盒对p27抗原的检测分析灵敏度表现良好。

实验2、3结论:明日达的试剂盒在对ALV-A/B/J/K四种亚型的细胞感染检测中都表现出较好的分析敏感性,相较于其他厂家来说,在低剂量的情况下检出时间早1-2天,而这个特点有助于禽白血病的早期诊断。

p27蛋白和ALV-A/B/J/K早期感染检测分析敏感性高的试剂盒产品,不代表在诊断敏感性上也具有优势,应该综合评判试剂盒的性能。明日达试剂盒早期分析灵敏度和诊断灵敏度这两个方面表现都非常优秀。

实验4结论:检测了三家进口和两家国产的试剂盒发现,进口试剂盒的重复性不一定比国产的好,有两家进口的试剂盒的cv%值在10%-15%,只有一家进口产品可以稳定在5%以内,而明日达的试剂盒在这方面可以做到<3%。

(实验数据为明日达自测数据,仅供参考。欢迎大家试用比对)

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