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综述分享 | 禽白血病的研究进展

2023-04-04 1838人阅读 来源:

一.病毒特征

禽白血病是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起禽的白血病和肿瘤性疾病,是最先被人们关注并研究的禽的三大肿瘤性疾病之一。我国在1999年从国外引进的白羽肉鸡中首次发现ALV。ALV是鸡肿瘤性疾病最主要的病原体也是目前已知的唯一拥有外源性和内源性重复活性的逆转录病毒。该病主要表现为免疫抑制、生长迟缓、多器官组织肿瘤等特征。对鸽、鹌鹑、鹧鸪等进行人工感染也可引起肿瘤病变。该病目前没有有效的商品化疫苗,控制本病唯一的办法是净化。ALV为单股正链RNA病毒,该病毒抵抗能力弱,各种脂溶性、去污剂、蛋白酶等都可以抑制其活性对紫外线有很强的抵抗力,耐低温,不耐酸碱和高温,在50℃可保持活性8 min,60℃能保持30s。

二. 防控方法

目前针对禽白血病的主要防控措施就是对种鸡场鸡群进行净化,培育无外源性 ALV感染的鸡群。该病净化的关键是建立无禽白血病的核心种群以及有效控制禽白血病的垂直传播与水平传播。由于我国不同地区饲养着不同类型的鸡和不同特色的地方品种鸡,对这些不同鸡群,ALV净化要求的程度是显著不同的。在制定净化方案时需对核心群祖代进行 ALV 感染情况调查,并结合养殖场实际情况制定净化方案。

三.检测技术研究进展

国内的ALV净化工作起步较晚,至2013年基本控制了禽白血病疫情发生,但2015年后ALV又在我国地方品种鸡中流行2021年被我国列为《国家动物疫病监测与流行病学调查计划(2021—2025年)》中需要防范的主要禽病之一。因目前无有效的商品化疫苗,检测方法就成为净化及防控的有效手段。

1  病原学检测
病原学检测主要是病毒分离鉴定。将感染动物的粪便、精液、血液、组织(脾脏、肾脏、淋巴结、肝脏等)处理后接种ALV敏感细胞来分离病毒。病毒分离后用反转录PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、中和试验(NT)等方法,对分离毒株进行鉴定和亚群区分。病毒分离鉴定是诊断禽白血病的金标准,但其对实验室条件要求高,培养时间长,经济成本高,培养过程容易受外界污染,因而难以在基层推广应用。

2  病理学检测
 病理组织切片

运用病理组织切片技术进行鸡群ALV感染筛查。通常选取鸡群中已经产生明显肿瘤病变的组织,进行常规制片和苏木精-伊红染色,通过显微镜观察病变组织的病理形态。该方法能确定肿瘤产生但不能确定产生肿瘤的原因。病理组织切片观察需要具备一定的经验,初学者容易做出误判。随着分子生物学技术的飞速发展,病理组织切片技术的使用越来越少。

 免疫组化技术

免疫组化技术是通过标记ALV特有抗原或与ALV相结合的特异性抗体,对组织内分布的抗体或抗原进行原位检测的技术。近期相关研究成果较少,可能是因为抗原表位识别需要特异性抗体,而针对不同亚群ALV就需要设计合成不同的特异性抗体,成本较高,操作繁琐。,因此主要应用于实验室研究,而基层推广应用较少。

 间接免疫荧光检测(IFA)

IFA是利用抗原与抗体反应的原理,对抗原或抗体进行荧光色素标记,通过观察抗原和抗体结合后是否产生荧光反应来进行病毒筛查。如运用此种方法进行ALV检测必须具备荧光显微镜、ALV各亚群特异性单克隆抗体等;可能会出现非特异性荧光,对ALV的检测筛查产生主观误导。以上局限性制约了该方法的推广应用。


3  血清学检测

 中和试验(NT)

传统NT技术是一种可以检验ALV抗体或抗原且敏感度较高的技术。传统NT技术敏感度较高,可以进行大批量疑似ALV感染鸡群检测,但由于其对实验室条件要求较高、操作繁琐、所需时间较长等原因,在实际生产过程中很少用于禽白血病筛查和诊断。为克服传统NT技术的缺点,很多科研学者不断运用新技术,尝试对NT技术进行优化和改进:以假病毒为基础的NT技术,不仅可以检测抗体滴度,还可以进行高通量测定;创建mRNA转录抑制法,解决空斑减少中和试验的检测周期长、敏感性低等问题,使其更加灵敏、快速、精确;以改造工程细胞为基础的中和抗体检测方法,可以大大减少多种病毒的前期改造工作,使其能够快速应用于新发传染病研究。NT 技术虽然仍有不足,但是随着新技术的不断研发,其在ALV检测中重要性也会重新体现。

 ELISA

ELISA 方法可用于血清、细胞培养液、胎粪等材料的ALV检测。国内外针对ALV设计的ELISA 检测试剂盒主要检测ALV的p27抗原,其优势在于省时省力、样品所需用量少,可以对大批量样品进行检测,不需要大量的仪器设备,现已成为国内外众多种鸡培育公司、养鸡场的主要 ALV检测方法。但是p27抗原高度保守,无法区分外源性和内源性 ALV,还需要对ALV阳性样品env基因(或 gp85 基因)进行测序才能划分ALV亚群。但ELISA试剂盒以其设定的S/P值为判定标准,对检测结果可能会出现“假阳性”或“假阴性”的误判;即使达到阳性S/P值判定标准,也只能证明样品曾经感染过 ALV,因而会造成一定数量的“误杀”损失。因此,提高操作人员ELISA检测熟练度,有针对性的选择灵敏度高、稳定性强的ELISA 检测试剂盒,对于减少误差,加快场内ALV净化起着至关重要的作用。

 胶体金免疫层析

胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物,通过标记与ALV相应的特异性抗原或抗体,使待检样品中相应的抗体或抗原在载体的T线或C线发生特异性免疫显色反应的一种检测方法,其优势在于操作简单、实用性强。


4  分子生物学检测

 RT-PCR
RT-PCR检测技术通过提取样品特异性核酸,结合微量RNA进行ALV检测。但是RT-PCR 方法对样品病毒含量无法定量,而且容易出现假阳性或假阴性,PCR 扩增产物需要电泳观察等,已逐渐被荧光定量 PCR 技术代替。

 荧光定量

PCR荧光定量 PCR 检测方法以设计指定的ALV荧光探针和特定引物为核心,对ALV进行快速检测和定量,是一种检测灵敏度高、易于操作、自动化程度高的省时省力的检测方法。ALV 荧光定量 PCR 检测方法特异性强、重复性好,因此被广泛应用。

 数字PCR(ddPCR)

ddPCR作为一种新型生物检测技术已经逐步应用于病原微生物检测、病原体定性等多个领域当中,其原理是对样品进行PCR扩增前先进行微滴化处理,通过对PCR扩增后产物进行微滴判读,来确定检测样品为阳性或阴性。其优点在于不需要依赖Ct值和标准曲线就能实现绝对核酸定量,对核酸浓度要求低,对特殊样品有一定的高耐受性,检测费用低廉。但是ddPCR检测仪器较为精密,对检测人员操作要求高,基因倒位或大片段缺失会影响检测准确性,因而限制了其适用范围。

 环介导等温扩增(LAMP)

LAMP检测技术从问世到现在已有20多年, LAMP 检测技术不需要对各阶段反应温度进行繁琐设定,全过程在同一温度设定条件下即可完成。不仅如此,这项检测技术还大大降低了对各种设备仪器的要求,反应时间也比RT-PCR缩短了一半以上。

 高敏荧光微球检测

高敏荧光微球检测方法是根据时间分辨荧光免疫层析原理设计的一种应用于ALV检测的新型检测方法,其通过仪器读取反应后免疫复合物中的荧光微球发光值,测算ALV p27抗原数值,从而进一步判定是否感染ALV。此种方法操作简便,可适用于大批量样品的快速定量检测,与胶体金试纸条检测方法一样,可作为基层使用的快速诊断检测技术。

参考文献:

[1]张帆帆,涂凌云,李海琴,曾艳兵,康昭风,谭美芳,谭佳,方绍培,杨群.J亚群禽白血病病毒致病机理研究进展[J].中国兽医学报,2021,41(11):2288-2293.

[2]李德娟,崔梦笛,王学静,王志永,樊宝良.禽白血病病毒及其受体研究进展[J].黑龙江畜牧兽医,2022(09):34-41.

[3]王慧.禽白血病的流行与种群净化技术研究进展[J].湖南畜牧兽医,2022(05):44-46.

[4]胡璇,温贵兰,张喜懿,欧德渊,李涛.禽白血病的研究进展[J].贵州畜牧兽医,2021,45(01):36-40.

[5]张振兴,薛晓岩,胡骑,季佳,王斌,宋建领.禽白血病检测技术研究进展[J].中国动物检疫,2022,39(08):86-91.

[6]陈子召,罗海燕.禽白血病净化进展及分析[J].养禽与禽病防治,2020(10):40-45.