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猪场检测常用的三种病毒核酸提取试剂盒

2022-03-23 2079人阅读 来源:

由于双疫情在全世界持续肆虐,作为专业名词的“核酸检测”业已家喻户晓。对于牧场来说,非瘟检测也已经成为猪场生产管理中的一部分,而核酸提取技术,作为实验室检测环节的第一步,相关产品的选择也是颇受重视。当前高效又便捷的核酸提取产品的广泛使用,是经过众多科学家和团队不断探索的结晶。那么,有哪些核酸提取产品我们可以在牧场检测过程中使用呢?小编今天跟大家简单聊一聊。

核酸提取技术的发展

1869年,瑞士科学家F. Miescher利用胃蛋白酶粗提液消化脓血白细胞,发现了除蛋白质之外的新物质,当时命名为“核素”,这也是首例提取出的粗糙DNA;1889年,R. Altmann发现“核素”pH呈酸性后,正式命名为核酸;1948年,Chargaff使用柠檬酸钠和RNase获得了具有天然性状的DNA;1957年,Kirby利用酚氯仿异戊醇抽提法提取DNA;Marmur于1961年创建了SDS提取法;1979年,Chirgwin创立了异硫氰酸胍法提取RNA,这也是Trizol法提取RNA的基础。

在众多前人研究的基础上,随着各科研团队和生物试剂公司继续对核酸提取方法进行研发和创新,以及对吸附核酸新材料(硅胶柱、磁珠)的研究和应用,才有了目前市面上主流的柱式法核酸提取试剂盒和磁珠法核酸提取试剂盒。随着自动化提取仪研发的不断开展,又分别出现了磁珠法核酸提取仪和柱式法核酸提取仪。磁珠法核酸提取仪凭借其提取通量高、提取快速、操作简便、性价比高等特点已成为主要的核酸提取方法之一。而柱式法核酸提取仪(需包含机械臂、吸液系统、离心系统等)受限于提取通量偏低、仪器成本高等原因,导致其市场占有率较低。所以,磁珠法机提试剂盒、柱式法手提试剂盒、磁珠法手提试剂盒是猪场检最常用的三种病毒核酸提取试剂盒。

三种病毒核酸提取试剂盒的区别

1. 磁珠法机提试剂盒(也叫预分装试剂盒)

优点:自动化程度高,提取通量高,提取快速,满足不同提取通量的需求(16位、32位、48位、64位、96位、192位等)。

缺点:不适用于小量样本的提取,提取通量相对固定,不够灵活,单条预分装耗材成本较高,全自动提取仪器价格较贵。

主要应用场景:适用于样本量较大的实验室。如果样本量不足8例,或者预分装试剂盒提取后只剩余几例样本,用预分装试剂盒就会造成试剂浪费,单条预分装试剂盒的价格又相对较高,此时,手动提取的方式就会发挥重要作用。

2. 柱式法手提试剂盒

优点:提取通量灵活,操作简便,单个样本提取时间<15min,核酸纯度高

缺点:不适用于大量样本的提取,需要用到高速离心机。

主要应用场景:适用于样本量较小的实验室。

3. 磁珠法手提试剂盒

优点:提取通量非常灵活,操作简便,无需使用高速离心机,所需器材只是简单的磁力架,磁力架品质差异较大,应选择磁力较大高品质产品。

缺点:不适用于大量样本的提取,对操作熟练度有一定的要求。

主要应用场景:适用于样本量较小的实验室。


在这三种试剂盒中,大多数实验室都采用“预分装+手提”的组合进行核酸提取。手提试剂盒虽然提取通量低,但提取通量灵活,适用于小量样本的提取,在这个组合中起到了重要的“打补丁”的作用。猪场检测最常用的手提试剂盒是柱式法,而磁珠法手提试剂盒占有率较低。这可能与实验人员对这种方法了解较少以及各生物试剂公司推广较少有关。其实,相较于柱式法,磁珠手提试剂盒有着比较明显的优势:在保证高提取灵敏度、操作灵活简便的基础上,只需要使用磁力架,不需要使用高速离心机,操作更为简便快捷。这也就使得磁珠手提试剂盒具有更广泛的应用场景。

参考文献

[1] Dahm R. Friedrich Miescher and the discovery of DNA[J]. Developmental biology, 2005, 278(2): 274-288.

[2] Altmann R. Ueber nucleinsäuren[J]. Arch. f. Anatomie u. Physiol, 1889, 1: 524-536.

[3] Vischer E, Chargaff E. The separation and quantitative estimation of purines and pyrimidines in minute amounts[J]. Journal of Biological Chemistry, 1948, 176(2): 703-714.

[4] Kirby K S. A new method for the isolation of deoxyribonucleic acids: Evidence on the nature of bonds between deoxyribonucleic acid and protein[J]. Biochemical Journal, 1957, 66(3): 495.

[5] Marmur J. A procedure for the isolation of deoxyribonucleic acid from micro-organisms[J]. Journal of molecular biology, 1961, 3(2): 208-IN1.

[6] Chirgwin J M, Przybyla A E, MacDonald R J, et al. Isolation of biologically active ribonucleic acid from sources enriched in ribonuclease[J]. biochemistry, 1979, 18(24): 5294-5299.